E coli. strain stock(-80C)要先畫plate, 畫出singal colonies,

selection singal colony culture in fresh LB, shake over 180 rpm 16-18 hr, 我都限定18 hr,這樣種菌的數目比較穩定.

種菌

starter after cultured 18-16 hr, and regeneration (將種菌取 regeneration的LB medium 體積的1/100~1/1000, 如500mL LB加種菌5mL~0.5mL)

補充一下,加入種菌前先取2mL新鮮的LB(Blank)

加入種菌後,搖晃均勻,再取2mL(測訂為起始菌量),之後每養一個小時取2mL的菌液,2個小時後每30分鐘取2mL的菌液,當測定到OD600增加,增加唷!(養後測定值-養前測定值)

養到2-3小時間測定到OD600值增加了0.3-0.4之間即可停止,在冰上或冰箱靜置1hr即可進行製作.

我方法還沒有打好所以沒有步驟給妳, 所以妳可以參考"molecular cloning"using calcin chloride, 1.116-1.118

我有改的地方是stock cell 原本是用DMSO+100mM CaCl2我改用10% glycerol+100 mM CaCl2.

另外,裏頭wash buffer MgCl2-CaCl2 (80mM-20mM)的配置,先配好100mM MgCl2及100mM CaCl2, 取80mL 100mM MgCl2與20mL 100mM CaCl2混合成100 mL, 體積增加則以此比例混合.

herolin0205: 你人好好噢～

只擔心他有看沒有懂....^^

我倒是沒看懂...