我最近在幫我老師做研究計畫的實驗，發現到嚴重 Acute Lung injury 的 Rat 可能也有引起 Pulmonary hypertension，導致 Rat 死亡時，打開胸腔，血液很明顯的都積在 vana cava 和 右心房，懷疑有 Right heart failure。

我的老師要我在採肺葉檢體時，同時將心臟踩下去做切片。
問題來了。要怎麼裁切心臟做石蠟包埋？

附上限制級圖片兩張

1. 大鼠用retractor撐開胸腔的畫面實在很獨特。
2. 原因是Pulmonary hypertension導致右心代償失敗，然後心房擴張。
3. 組織病變對於判斷心臟衰竭沒有直接的幫助，反而是這兩張照片很有用。因為肺因性心臟衰竭，不太可能出現炎症、壞死之類的，如果要出現上述這些病變，大鼠肺會先淹死自己。
4. 整顆心臟丟下去固定，然後像課本一樣切四腔室斷面，不過沒啥作用，你可能只會看到變薄的心房而已。

肺臟轟轟烈烈的顯微病變對整個致病機制比較有意義。除非心臟有其他因素干擾，不然心臟應該做切片貢獻不大。當然例行採材可以採，看你要丟整顆還是切右心，沒有差。

做實驗很害怕禮拜五呀...出了什麼問題禮拜六日可能都沒有人在~~

對了，冠狀動脈怒張，代表心肌缺氧代償。然後胚胎學角度，其實心房只是囊狀擴張的靜脈，所以vena cava, atrium都擴張是合理的。對了，這是幾週的大鼠？

這是 8~9 週大的 SD rat, 430g, male

很感謝您的回答，心肌缺氧是已知，嚴重肺損傷，吸100% 純氧時的 動脈血氧分壓 也只有 60~70 mmHg

你剛好做到一個很容易讓動物掰掰的系統。
如果induce時間沒有很長(1-3 day)可能什麼病變都看不到，不過以比例漲這麼大我也是第一次看到

induce 的時間其實很短，從施行 lung injury 到有這個病變，前後只有 2 小時。
我模擬的是猛爆性肺炎，就連我的老師也很驚訝，短短兩小時，就可以引起 pulmonary hypertension 導致 right heart failure，-所以，想試著能不能找到什麼 early factor，如果矇到了，說不定是一個可以上 NATURE 的報告。因為，只要能找到 early factor，

而且，在這短短的兩個小時，出現的，不只是 extremly hypoxia 和pulmonary hypertension，還伴隨 severe hypothermia (from >37C to <33C)，whole blood neutrophilia (NEUT: from ~20% to 60% up; SD Rat 正常的 NEUT 是 16~25%)，Total WBC 增加一倍，

還有血壓狂降 (MBP from >80mmHg to <20mmHg)，心跳從代償性增加轉成狂降 (about 350bpm to >450bpm then <150bpm)
這些症狀符合臨床上的 Acute lung injury /ARDS induced Septic shock ，使用的內毒素 (LPS) 劑量只有目前已發表 paper 的 1/10。這個 model 以前都沒有人發表過，說不定有機會。

另外，post-injury 兩個小時後，可以從氣管抽出至少 2mL 的 protein rich exudate fluid。對一個 400g 左右的 rat，這些液體已經夠淹死它了
我現在等肺臟切片結果，如果切片結果有明顯的 inflammatory cell infiltration，甚至還有因為 pulmonary surfactant insufficiency 引起的 atelectasis 就更確定了。

只用1/10 LPS induce?不太可能吧
目前我知道鼠輩對LPS耐受性是其他動物的100倍。
你說得狀況聽起來像典型的ARDS然後步入休克、右心衰竭，增加的炎症細胞來自於反應休克的脾臟擠出來的。

你指的early factor是指什麼？某種cytokine?還是sufactant insufficiency?
如果沒有看到很多炎症細胞也不要氣餒，因為休克的動物常有cytokines strom
另外你可能也要做一個control，因為我懷疑動物即使不induce，只是吸入液體（溺水）也會ARDS、Shock

一般在 paper 上常見引起 Rat Spesis 的方法是靜脈注射 LPS，劑量是 100 micro gram per Kg，我改成先用無菌的 normal saline 15mL/kg 灌洗肺部，爸 pulmonary surfactant 洗出，然後從氣管注入 10 micro gram per Kg 的 LPS，15~20 分鐘就可以引起嚴重的 hypoxia，兩小時內引起 septic shock。

我之前做過好幾次 pre-test，正常 rat 從氣管灌入 5mL/kg 以下的無菌 normal saline，在剛灌入的時候會讓血氧暫時下降，但是不會超過 30 分鐘，而且，在灌入時會維持 100% 氧氣供應，血氧即使往下掉，也不會低於 120mmHg，另外，觀察 6 小時候把老鼠喀擦掉，觀察肺部情況，沒有造成明顯肺損傷。

Early factor 是什麼我還沒有一個方向，可能是 cytokines 或是 inflammatory mediators，甚至，我懷疑，嚴重的 electrolyte imbalance 都有可能。

可能把灌入的saline量control一下，會比較客觀。
有可能是LPS加重acute lung injury的inflammatory response，或者是刺激inflammatory mediators去抑制anti-inflammatory group>

我在臨床上看到的shock animal，最後幾步常常是Cardiac output下降/blood pressure下降-> Hypoxia + inflammation-> More shock -> heart failure -> cardiopulmonary failure

我灌入的 normal saline 量都是固定的上面給您看的是沒有治療的對照組，一樣的 injury procedure，再加上治療，6 小時後變成這樣，治療效果應該是算還不錯

限制級圖片再上

看起來好很多呀！記得要秤重

我每一隻 rat 都固定取 right superior lobe 和 post caval lobe，去除表面多餘水分之後，秤濕重，然後，準備用 60C 烘乾 72 小時後，秤乾重，計算 wet-to-dry ratio，這樣可以嗎？

Good Job!
不過可能跟正常大鼠平均肺臟重量比，會比較好比，畢竟細胞內液量還是很驚人，可能會縮小比率？我沒有類似經驗